高血压发展过程中脑血管平滑肌细胞离子通道的变化

脑血管重构是高血压发展过程中最重要的病理生理改变,由此引起的脑卒中更日益危害人类的健康。在高血压发展过程中,脑血管平滑肌细胞上分布的多种离子通道,如钾钙、氯等均发生变化,导致细胞内离子浓度异常,在脑血管重构的发生发展过程中发挥了重要作用。

调节类风湿关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶表达的信号转导和相应的药物作用靶点

影响类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis,RA)滑膜细胞基质金属蛋白酶表达的胞外信号包括T淋巴细胞、细胞因子、生长因子、干扰素和神经肽等,它们引起的信号在胞内主要依赖G蛋白偶联跨膜受体介导的途径和丝裂原激活的蛋白激酶途径转导。作用于这些信号或其转导过程的药物正成为治疗RA、预防RA关节破坏的新策略之一。

抑郁症分子生物学研究进展

分子生物学的飞速发展为认识抑郁症的本质提供了新思路、新手段,使人们对抑郁症的研究从神经递质及其受体水平深入到受体后信号传导等领域。其中许多新的发现不仅为阐明抑郁症的发病机制,还为新型抗抑郁药的研制提供了有利的证据。该文就近年来抑郁症的分子生物学相关研究作一综述。

Calcium Channel Blockers《钙离子阻断剂》

酪氨酸蛋白激酶与突触可塑性及学习记忆的关系

近年来酪氨酸磷酸化在成年哺乳动物神经系统中的重要作用逐渐受到重视,酪氨酸蛋白激酶在调控与细胞增殖、分化、迁移及代谢相关的信号转导通路中起关键作用。本文主要对三种不同的酪氨酸蛋白激酶信号级联过程,即Trk受体酪氨酸激酶级联,Src家族非受体酪氨酸激酶级联及Eph受体酪氨酸激酶级联,以及它们在成年动物神经元突触可塑性及学习记忆形成过程中的重要作用及可能机制作一综述。

游离脂肪酸与胰岛素抵抗

胰岛素抵抗是 2型糖尿病的重要组成部分,是引起代谢综合征的病理基础,但它的发病机制还不是很清楚。近年来发现在许多胰岛素抵抗状态均伴随着游离脂肪酸 (freefattyacids,FFA)水平的升高,逐渐引起了人们注意,FFA不仅可以干扰葡萄糖代谢的不同环节,重要的是在胰岛素受体及受体后的信号转导方面发挥作用,降低胰岛素刺激的葡萄糖转运。噻唑烷二酮类药物(TZDs)是近年来上市的胰岛素增敏剂,其主要效应之一就是降低FFA水平。可见,以控制FFA代谢紊乱为目标设计具有新作用机制的药物,将会使胰岛素抵抗和 2型糖尿病的治疗前景变得更加广阔。

哇巴因信号的传递及其对细胞生长和死亡的影响

哇巴因(ouabain)是能抑制Na+,K+ ATPase活性的强心甾类物质,在Na+,K+ ATPaseα亚单位位于细胞膜外侧有 1个ouabain特异性结合位点,ouabain结合时,活化胞浆中具酪氨酸蛋白激酶活性的Src,形成Na+,K+ ATPase Src复合物,作为一个活化的“二元”受体,介导信号传递。oua bain对细胞生长和死亡起重要调节作用。ouabain介导细胞发生杂合性死亡,即同一细胞兼具细胞肿胀、细胞器溶解等坏死特征和核凝集、DNA裂解、caspase级联反应等凋亡特征,对于细胞死亡的认识具有重要意义。

2,3-二甲基-2-丁胺新衍生物对脑神经细胞钾通道的影响

目的　研究 2, 3 二甲基 2 丁胺衍生物对大脑皮层神经细胞钾通道的影响。方法　在原代培养的新生大鼠大脑皮层神经元细胞上,用细胞膜片钳全细胞记录技术,评价新衍生物对神经元IA及IK电流的影响。结果　在评价的 9个新化合物中,化合物(5) (6) (7) (9)不影响皮层神经元细胞上钾通道的活性, 化合物 ( 4 ) ( 8 )能降低皮层神经元IK电流, 这 6个化合物均可激活血管平滑肌钾通道; 另一方面,其余 3个化合物对血管平滑肌钾通道功能无明显影响,但其中的化合物 (3)可降低神经元上的IK电流。结论　2, 3 二甲基 2 丁胺衍生物对脑神经细胞上钾通道的作用不同于其在血管平滑肌上钾通道的作用特点。

非诺贝特对高脂血症兔血清及脂肪细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的　观察非诺贝特干预对高脂血症兔血清及脂肪细胞分泌肿瘤坏死因子 α(TNF α)的影响,并探讨其可能机制。方法　10只新西兰大白兔给予高胆固醇饮食饲养 8w后,随机分为两组:①高胆固醇组:继续饲以高胆固醇饲料wk;②非诺贝特组:在饲以高胆固醇饲料的基础上给予非诺贝特(30mg·kg-1·d-1 ),共 4wk。另选普通饮食 12wk兔(n=5)作为对照组。取腹股沟皮下脂肪组织称量,并行脂肪细胞培养,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测血清及脂肪细胞培养液中TNF α水平。半定量逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)测定脂肪细胞PPARαmRNA的表达。结果　高胆固醇组血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平明显高于对照组(P<0 01),非诺贝特干预 4wk未对血脂产生明显影响,但能降低体重 ( -19% )及皮下脂肪量 ( -40% ),并能降低血清TNF α水平 ( -44 7%,与高胆固醇组比,P<0 05 )。非诺贝特呈剂量依赖性降低脂肪细胞分泌TNF α。三组兔脂肪细胞PPARαmRNA表达差异无显著性。结论　非诺贝特能独立于降脂作用外降低高胆固醇饮食饲养兔体重和皮下脂肪量并降低血清及脂肪细胞分泌TNF α,这一作用可能有利于动脉粥样硬化及肥胖的防治。

TEM-105编码基因的功能研究

目的　获得浙江地区临床分离的 4株肺炎克雷伯菌所产的TEM型β 内酰胺酶编码基因的序列,鉴定其基因型,并了解其相关特性。方法　PCR扩增TEM型β 内酰胺酶编码基因片段,克隆入pGEM Teasy载体,表达于感受态细胞大肠埃希菌DH5α中,双脱氧链终止法测定核苷酸序列,确定基因型;其基因与原核表达载体 (pET 28c)连接,并在感受态细胞大肠埃希菌DH5α中进行原核表达,提取质粒,用PCR进行表达鉴定,用等电聚焦电泳测定原核表达菌株中酶的等电点(pIs),用ESBLs表型确认试验鉴定表达菌株的表型,另外对这些临床菌株进行接合试验。结果　PCR扩增结果显示这 4株细菌产生的TEM型β 内酰胺酶编码基因片段含1 009个核苷酸,其表达酶的性质均为非ESBLs,pIs均为5 4,临床菌株的质粒接合试验均为阳性。这 4株临床菌株所产生的TEM型β 内酰胺酶的编码基因已被GenBank命名为TEM 105(GenBank注册号:AF516720)。结论　浙江地区这 4株细菌所产TEM型β 内酰胺酶均为TEM 105,在世界上我们首次从临床分离株中发现TEM 105。

TSA抑制NB4细胞去乙酰化酶活性并促进细胞周期素激酶抑制剂表达

目的　研究曲古菌素A(TrichostatinA,TSA)对NB4细胞组蛋白去乙酰化酶HDAC1的作用及细胞周期依赖激酶抑制剂P21WAF1 /CIP1的表达,探讨TSA抗白血病的作用机制。方法　培养人的急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,应用TSA在不同浓度和不同时间点处理细胞,提取细胞的总蛋白和mRNA,用Westernblot蛋白质印迹技术检测HDAC1和P21WAF1 /CIP1 蛋白表达, 并用RT PCR技术同时检测P21WAF1 /CIP1 mRNA的表达水平。结果　①TSA明显抑制HDAC1的活性和表达,在IC50浓度时作用 4hHDAC1已经降低,持续 48 h;在较低浓度 ( 37 5 nmol·L-1 )时就对HDAC1有明显的抑制作用,但在 75 ~ 300 nmol·L-1时HDAC1降低水平未见明显区别;②TSA明显促进P21WAF1 /CIP1蛋白和mRNA的表达,在 8h时mRNA已增高, 12h后可见到蛋白增加,在浓度大于 150nmol·L-1时呈明显时间和剂量依赖性。结论　TSA明显抑制HDAC1活性和表达,促进细胞周期依赖性激酶抑制剂P21WAF1 /CIP1蛋白和mRNA水平升高,有明显的抗白血病作用。抑制HDAC1活性和促进P21WAF1 /CIP1增加可能是TSA抗白血病的机制之一。

松果菊苷对TNFα诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

　目的　探讨肉苁蓉提取物松果菊苷对TNFα诱导的SH SY5Y细胞凋亡的保护作用。方法　用MTT法检测细胞存活率,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,并用荧光酶标仪测定caspase 3的活性。结果　100μg·L-1 TNFα处理细胞 36h显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达37%;细胞内活性氧水平及caspase 3的活性升高;而线粒体膜电位却明显降低,红 /绿荧光强度的比值由正常的 5 97降低为 0 35左右。而预先给予 1, 10或者 100mg·L-1浓度的松果菊苷处理细胞 2h,可提高细胞存活率;并可有效抑制DNAladder的发生;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到25 9%, 18 3% 和 8 2%;激光共聚焦显微镜结果显示松果菊苷可明显抑制细胞内活性氧产生;并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase 3的活性不断降低,并呈现了一定的剂量依赖性。结论　松果菊苷能抑制TNFα诱导的SH SY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平,抑制caspase 3的活性和维持线粒体膜电位的高能状态有关。

促神经细胞分化小分子活性物质的筛选研究

目的　建立便捷有效的高通量筛选方法用以NGF样促神经细胞分化小分子活性物质的初级筛选。方法　采用经NGF诱导的PC12细胞,以NGF为阳性对照,通过对分化细胞百分率的测定和存活细胞的MTT染色,建立模型并对样品进行筛选。结果　所建模型定量反映NGF生物活性;应用该模型对1 600多种化合物进行筛选,发现了多个不同活性类型的样品。其中代号为B的化合物作用持续时间长,量效关系明显,且较少引起细胞死亡。结论　该工作为深入筛选促进中枢神经再生药物和神经细胞肿瘤分化诱导剂提供了模型和样品基础。

外周α₁、α₂受体作用减弱脑室注射组胺对颈动脉窦反射的抑制

目的　探讨外周α1 和α2 肾上腺素受体 (α1 AR,α2AR)在脑室注射(icv)组胺 (HA)对颈动脉窦压力感受性反射(CSR)重调定中的作用。方法　孤离麻醉SD大鼠的双侧颈动脉窦区,将不同窦内压 (ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic五参数曲线拟合,求得ISP MAP关系曲线及其特征参数,观察icvHA以及预先在外周静脉注射(iv)α1 或α2 AR拮抗剂对CSR的影响。结果　icvHA( 60μmol·L-1, 5μl)导致ISP MAP关系曲线后半程明显上移(P<0 05),ISP和增益关系曲线中部明显下移 (P<0 05 ),反射参数MAP反射变动范围及反射最大增益减小 (P<0 05),而阈压与饱和压增大(P<0 05);预先外周iv选择性的α1 AR拮抗剂酚苄明 (PBZ, 2 5μmol·L-1, 0 15μl·g-1 )或α2 AR拮抗剂育亨宾(YOH, 5μmol·L-1, 0 15μl·g-1 ),均能明显加强HA的上述效应,YOH的这种加强作用不如PBZ的显著 (P<0 05 );单独外周iv相同剂量的PBZ或YOH对CSR无影响 (P>0 05 )。结论　脑室给HA使CSR产生快速重调定,反射敏感性下降;外周α1、α2 AR作用可减弱icvHA对CSR的重调定;外周α1 AR在调制这种抑制性重调定的过程中可能发挥重要作用。

缺血预适应对沙土鼠脑缺血再灌注后纹状体多巴胺及其代谢产物的影响

　目的　研究缺血预适应对沙士鼠脑缺再灌注后纹状体中多巴胺(DA)及其代谢产物的影响,以探讨其神经保护作用的可能机制。方法　应用沙土鼠脑缺血再灌注模型,脑缺血时间为 5min。96只沙土鼠随机分为假手术组 (S)、缺血组(I)、单纯预适应组 (Po)、缺血预适应组 (Ip)。在再灌注 0(即缺血末)、5、30、60min时,断头、分离纹状体,用高效液相-电化学检测器 (HPLC ECD)分别测定各组沙土鼠纹状体DA、3, 4双羟苯乙酸 (DOPAC)和高香草酸 (HVA)的含量。结果　与假手术组相比,短暂缺血组在缺血再灌注期间纹状体中DA、DOPAC和HVA含量均无显著性变化 (P>0 05)。再灌注期间,预适应、缺血再灌注组DA含量均显著低于假手术组,但在再灌注 0min和 30min时,预适应组DA含量及显著高于缺血再灌注组,分别增加了 28% (P<0 01)和 22% (P<0 05)。与假手术组相比,预适应组的DOPAC和HVA含量在再灌注期间均无显著变化 (P>0 05 );缺血再灌注组DOPAC含量在再灌注 5min时有明显增加;HVA含量在再灌注 30min时增加至峰值。结论　缺血预适应能部分抑制沙土鼠脑缺血再灌注期间纹状体DA的降低,显著减少DA氧化代谢产物的产生,从而在脑缺血再灌注损伤中起保护作用。

丹参酮Ⅱ_A固体脂质纳米粒的体外释药和大鼠肠吸收特性的研究

目的　考察丹参酮ⅡA固体脂质纳米粒 (TA SLN)的体外释药性质,研究肠道最佳吸收部位和吸收机制。方法　用透析法测定TA SLN体外释药速率,大鼠在体肠吸收实验考察肠道吸收行为。结果　药物的体外释放符合Weibull方程,具有缓释特性。在十二指肠,TA SLN与丹参酮ⅡA溶液的吸收率差异无显著性(P>0 05),在空肠、回肠和结肠段,TA SLN与丹参酮ⅡA溶液的吸收率差异均有显著性 (P<0 05)。丹参酮ⅡA溶液在各肠段的吸收率差异无显著性 (P>0 05),但TA SLN在结肠段的吸收率高于其它肠段,差异具有显著性(P<0 05)。在纳米粒浓度较高时,吸收趋向饱和;加入空白纳米粒,未增加纳米粒小肠吸收率;降低Na+浓度以及加入吸收促进剂(脱氧胆酸钠、吐温 80和十二烷基硫酸钠)和能量抑制剂(2, 4 二硝基苯酚)均使纳米粒小肠吸收率增加。结论　TA SLN在体外释放介质中可缓慢持续释药;结肠是TA SLN的最佳吸收部位。

健康人连续口服不同剂量胺碘酮的血药浓度的临床研究

目的　比较中国健康受试者连续口服胺碘酮不同剂量后,各种药代动力学参数的特点。方法　16名健康男性受试者随机分为两组,第一组 (A组 )连续口服胺碘酮 800mg·d-1;第二组(B组 )连续口服胺碘酮 200mg·d-1。采用HPLC法测定血浆中的胺碘酮及其代谢物去乙基胺碘酮浓度。结果　A、B两组的达峰浓度Cmax分别为 ( 1 17±0 38 )和(0 84±0 33)mg·L-1,达峰时间Tmax分别为(4 0±2 0)和(5 1±1 4)h,终末消除半衰期 (T1 /2 )分别为 ( 410 5±137 1)和(345 9±237 0)h,组间比较均无差异;A组、B组起作用浓度分别为 ( 0 93±0 28 )和 ( 0 57±0 25 ) mg·L-1,差异有统计学意义;A组、B组发生药物反应的时间及累积剂量基本一致;发生药物反应的浓度A组 ( 0 71 ~1 34)mg·L-1,B组 ( 0 29 ~1 11 )mg·L-1。结论　在一定时间内,随口服胺碘酮剂量增加,血药浓度相应增加,提示在临床用药中如在开始用药时通过给与较大剂量的负荷量,可能获得更快的起效作用。

PGA1对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的　研究前列腺素A1(PGA1)对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞ICAM 1表达的影响。方法　培养大鼠心脏微血管内皮细胞,建立细胞缺氧再给氧模型,通过凝胶电泳迁移率(EMSA)测定内皮细胞NF κB的活性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定内皮细胞粘附分子ICAM 1的蛋白表达,Northernblot分析测定ICAM 1mRNA的表达。结果　大鼠心脏微血管内皮细胞在缺氧刺激后NF κB活性显著增加,ICAM 1的蛋白和ICAM 1mRNA的表达明显增加,再给氧后升高更明显;PGA1处理组NF κB活性较缺氧再给氧组明显下降(P<0 01),ICAM 1的蛋白和ICAM 1mRNA表达明显下降(P<0 01),呈剂量依赖效应。结论　前列腺素A1通过NF κB介导,下调内皮细胞ICAM 1的蛋白和mRNA表达。

氨茶碱对哮喘豚鼠嗜酸细胞IL-3、IL-5及GM-CSF受体表达的影响

目的　观察氨茶碱(AM)对嗜酸细胞(Eos)上白介素 5受体α(IL 5Rα)、白介素 3受体α(IL 3Rα)、粒 巨噬细胞集落刺激因子受体α(GM CSFRα)及共同β链(βcR)mRNA表达的影响,探讨茶碱促进哮喘Eos凋亡的机制。方法　 18只健康豚鼠随机分为正常组、哮喘组、茶碱组,每组 6只,以卵蛋白致敏激发制作豚鼠哮喘模型,密度梯度分离法分离支气管灌洗液(BALF)中的低密度Eos(HEos)及正常密度Eos(NEos),以末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,原位杂交检测各受体mRNA表达,RT PCR法检测EosIL 5Rα、IL 3Rα相对含量。结果　哮喘组HEos及NEos凋亡 (4±2, 3±2)明显低于正常组(8±2, 7±2,P<0 01),而哮喘组细胞数 (75±13, 51±11 )明显高于正常组(5±2, 10±3,P<0 01)。用AM 24h后不同密度Eos数量 ( 36±14, 33±8 )均明显低于哮喘组 (P<0 01, 0 05),AM组Eos凋亡 ( 15±5, 14±4 )明显高于哮喘组(P<0 01);哮喘组Eos表达IL 5、IL 3及GM CSFα受体mRNA,明显低于正常组 (P<0 01, 0 05 ),AM组中低密度Eos表达各受体mRNA均明显高于哮喘组 (P<0 05 );而哮喘组βcR表达(41±6, 39±7)表达显著高于正常组 (28±5,26±5,P<0 01),AM组βcR表达与哮喘组比较差异无显著性(P>0 05)。HEos表达各受体与NEo

紫草素诱导A375-S2细胞凋亡的分子机制研究

目的　研究紫草素诱导人黑色素瘤A375 S2细胞凋亡的分子机制。方法　MTT法、Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、Westernblot、流式细胞分析以及caspase活力分析等。结果　10μmol·L-1紫草素可明显地抑制A375 S2细胞的生长,其半数有效抑制浓度IC50为 (10 9±1 8)μmol·L-1。10μmol·L-1紫草素可诱导A375 S2细胞凋亡,并经历了caspase 9和caspase 3的激活。紫草素促进p53蛋白的积聚,Bax蛋白表达的上调和Bcl xL蛋白表达的下调,进而导致细胞色素C的释放,致使细胞凋亡。紫草素可使细胞周期停止在G1 期。结论　紫草素可诱导A375 S2细胞周期停止在G1 期,其诱导细胞凋亡的途径经过p53介导的Bax和caspase 9的激活。

1,5,8-trihydroxy-3-methoxy-xanthone对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的　研究 1, 5, 8 trihydroxy 3 methoxy xanthoneXanth对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　采用线栓法阻断大脑中动脉 (MCA)血流,造成局灶性脑缺血再灌注模型;评价大鼠行为功能、测定脑梗死体积及脑血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活性。结果　 1, 5, 8 trihydroxy 3 methoxy xanthone对大鼠脑缺血再灌注的模型组与假手术组相比,MDA含量升高 (P<0 05 ),SOD、GSH Px的活力降低 (P<0 05)。Xanth两剂量组与模型组相比MDA含量降低 (P<0 05),SOD、GSH Px的活力升高 (P<0 05)。结论　1, 5, 8 trihydroxy 3 methoxy xanthone对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与保护SOD、GSH Px的活性,减少脂质过氧化有关。

基于报告基因和干扰素-α信号通路的药物筛选模型的建立

目的　建立基于报告基因和干扰素 α(Interferon α)信号通路的药物筛选模型,用于筛选具有IFN α样活性的小分子化合物。方法　构建带有ISRE(IFN αstimulatedresponseelement)靶序列和报告基因的诱导性表达载体,并将其转染入血管内皮细胞 (ECV304 )中,筛选报告基因碱性磷酸酶(SEAP)表达受IFN α诱导的阳性克隆。选取相关的细胞因子干扰素 β、干扰素 γ和生长因子甲状旁腺素(PTH)进行模型特异性考察。结果　ECV304细胞中SEAP的表达受IFN α的诱导并呈现剂量依赖关系,IFN α的最高诱导表达率是IFN β最高诱导表达率的 9 0倍、IFN γ的 8 8倍、PTH的 9 1倍,具有相对特异性。IFN α对ECV304细胞无增殖作用。本方法的Z' 因子为 0 8,说明此模型具有很好的稳定性。结论　本模型的SEAP基因表达水平能够被其特异性配体强诱导表达,利用此模型在 96孔板上用化学发光法测定SEAP基因的诱导表达水平可筛选具有IFN α样活性的小分子化合物。

异甘草素对脑缺血再灌注小鼠认知功能障碍及能量代谢的影响

目的　研究异甘草素 (ISL)对脑缺血再灌注小鼠认知功能障碍及能量代谢的影响。方法　采用双侧颈总动脉反复夹闭再灌注造成小鼠学习记忆功能障碍模型。采用跳台实验和Y型迷宫实验测试小鼠学习记忆能力,采用反相高效液相色谱法检测脑组织ATP含量、腺苷酸池 (TAN)水平和能量负荷值(EC)。结果　ISL(10、20、40mg·kg-1 )延长跳台实验中潜伏期,减少错误次数;减少Y型迷宫实验中累计电击次数,增加正确反应次数;剂量依赖性提高脑组织中ATP含量、TAN水平和EC值。结论　ISL能改善反复脑缺血再灌注小鼠认知功能障碍,其作用机制可能与改善脑能量代谢有关。

黄芪提取物对局灶性脑缺血再灌注损伤的抗氧化及线粒体保护作用

目的　研究黄芪提取物 (Extractofastragalus,EA)对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的抗氧化及线粒体保护作用。方法　采用栓线法复制局灶性脑缺血 (MCAO)再灌注损伤模型,观察EA对大鼠脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸 (LD)的影响;检测脑组织线粒体组分中的SOD、MDA含量及ATP酶活性的变化 ;电镜观察缺血再灌注后脑组织神经元超微结构的改变。结果　EA对大鼠MCAO2h再灌注 24h后脑组织及其线粒体组分中SOD活性的降低有明显的抑制作用,能抑制大鼠脑组织和脑组织线粒体组分中MDA含量的增加,能抑制大鼠脑组织LD含量的增加; EA可明显提高脑组织线粒体组分中Na+,K+ ATPase,Ca2+,Mg2+ ATPase活性;电镜照片显示EA组能改善脑组织神经元在脑缺血再灌注后的结构破坏情况。结论　EA对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用的机制可能与其抗脂质过氧化和保护线粒体的作用有关。

雏菊叶龙胆酮对局灶性脑缺血损伤的保护作用及机制探讨

目的　研究雏菊叶龙胆酮 (Bellidifolin)对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法　利用电凝法制作SD大鼠右侧大脑中动脉阻塞 (MCAO)模型,于MCAO缺血后 4h和 24h进行神经行为学评分, 24评分后断头取脑测量脑梗塞面积,应用HE染色和免疫组化法观察Bellidifolin干预后缺血区病理学改变和ICAM 1、Bcl2蛋白的变化。结果　Bellidifolin能改善MCAO缺血后神经功能障碍并缩小脑梗塞面积;减轻相关脑区神经元损伤程度;显著抑制大鼠局灶性脑缺血损伤ICAM 1表达,上调缺血周边区神经元Bcl 2抗凋亡蛋白的表达。结论　Bellidifoli口服给药对缺血性脑损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制ICAM 1表达和促进Bcl 2表达有关。

钙激动剂诱导心肌肥大转录因子的表达

目的　探讨不同来源的细胞内游离Ca2+ 浓度( [Ca2+ ] )在钙神经磷酸酶 (CaN) 活化T细胞核因子 3(NFAT3 )介导心肌肥大中的作用。方法　分别用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ )或雷诺定 (RY)刺激培养的大鼠心肌细胞外Ca2+跨膜内流或细胞内Ca2+释放,检测CaN、NFAT3、锌指转录因子(GATA4 )蛋白量以及氚 亮氨酸 (3H Leu)参入量,环孢素A(CsA)作为CaN特异抑制剂。结果　AngⅡ、RY刺激1、3d,心肌细胞CaN、NFAT3、GATA4 蛋白表达及 3H Leu参入量较对照组明显增高 (P<0 05或 <0 01 )。CsA可抑制上述作用,与刺激组相比差异有显著性 (P< 0 05或 <0 01)。结论　刺激心肌细胞Ca2+内流及Ca2+释放,均可激活CaN NFAT3 信号通路。该信号通路的激活与 [Ca2+ ]i增加有关,而与[Ca2+ ]i的来源无关。CsA能够抑制AngⅡ和RY介导的CaN NFAT3 GATA4 表达的增加和蛋白质合成。

原花青素对Aβ_25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的　探讨原花青素(Procyanidins,PC)对β淀粉样肽25~35(βamyloidpeptide25 -35, Aβ25-35 )诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制。方法　采用MTT比色法分析细胞存活率, Hoechst33258 PI荧光染色法检测凋亡, RT PCR检测P53和bcl 2基因mRNA表达,Westernblot检测P53和Bcl 2蛋白表达。结果　不同剂量PC预处理PC12细胞 1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的凋亡,提高细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的核固缩,凝聚和碎裂,降低P53mRNA表达以及P53蛋白表达,增加bcl 2mRNA表达以及Bcl 2蛋白表达。结论　PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因P53和上调抗凋亡基因bcl 2表达有关。

碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素肾损害保护作用的体外实验研究

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对庆大霉素引起的体外培养的大鼠肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法　大鼠肾皮质经研磨、过网、胰蛋白酶消化,进行肾小管上皮细胞的体外培养。经Cytokeratin18抗体进行鉴定后,用庆大霉素建立损伤模型,观察bFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用。结果　①经形态学观察、Cytokeratin18免疫细胞化学方法鉴定;GM组与对照组比较,CAT、Na+,K+ ATP酶活性下降,而NAG活性和MDA升高 (P<0 01),提示肾小管上皮细胞的培养和庆大霉素损伤的建模成功。②bFGF+GM组与GM组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性(P<0 01 );而bFGF+GM组与对照组比较,CAT、Na+,K+ ATP酶、NAG酶活性差异无显著性 (P>0. 05 ),但MDA增高差异仍有显著性(P<0 05)。结论　bFGF能保护损伤的肾小管上皮细胞。

大黄素对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的　观察大黄素(emodin)对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化作用特点及量效关系,并观察大黄素对骨保护蛋白(Osteoprotegerin,OPG)mRNA表达的影响。方法　在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的大黄素,加药后 1、2、3d用MTT法检测细胞增殖, 3、5、7、9d用PNPP法检测细胞内碱性磷酸酶含量,加药后 7d检测细胞内OPGmRNA表达的量, 24d检测细胞上清中钙和细胞内羟脯氨酸含量。结果　大黄素能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性,实验中最佳作用浓度为 1×10-6 mol·L-1,最佳作用时间是 7d。大黄素能增加细胞内羟脯氨酸含量,促进OPGmRNA的表达。结论　大黄素可促进成骨细胞分化,增加OPGmRNA的表达。

四逆汤对大鼠肠缺血再灌注后肠粘膜细胞凋亡的影响及神经酰胺机制

目的　研究四逆汤(SND)对大鼠肠缺血再灌注 (II/R后肠粘膜细胞凋亡的影响,并从神经酰胺信使通路探讨其抗凋亡机制。方法　24只SD大鼠随机分为 3组(n=8):对照组(仅分离不阻断肠系膜上动脉)、模型组 (阻断肠系膜上动脉 1h后再灌注 3h)、SND组(每天 3g·kg-1 SND灌胃,连续 3天后手术)。取回肠末端组织行电镜检查;检测肠粘膜组织SOD活性、MDA及神经酰胺含量的变化,TUNEL法检测肠粘膜上皮细胞的凋亡指数,RT PCR法分析肠粘膜组织鞘磷脂酶(SMase)基因表达的变化。结果　模型组电镜下可发现许多典型凋亡的上皮细胞,凋亡指数达 30 82%6 34%,SND预处理后凋亡指数为 14 91%±5 40%,明显低于模型组(P<0 01);模型组SOD活性明显低于对照组 (<0 01),MDA与神经酰胺含量以及SMase的基因表达明显高于对照组(P<0 01),且神经酰胺含量与凋亡指数具有良好的正相关 (r=0 852,P<0 01),与SOD活性具有负相关(r= -0 775,P<0 01 )。SND预处理能明显增强SOD活性,降低肠粘膜组织MDA及神经酰胺含量,减少肠粘膜组织SMase的基因表达(P<0 01)。SND组凋亡指数与神经酰胺的含量亦呈显著的正相关 (r=0 832,P<0 01 )。结论　SND具有抗II/R后肠粘膜细胞凋亡的作用,其作用与它清楚氧自由基、抑制SMase的基因表达、减少神经酰胺的生成有关。

单室模型药物血管外给药零级、一级释放药物动力学

目的　建立单室模型药物血管外给药零级释放和一级释放的药物动力学,探讨以剂型中药物的释放动力学和活性药物固有的吸收、分布、清除动力学参数为基础的血管外给药零级释放和一级释放血药动力学。方法　以拉氏变换解微分方程和隔室模型分析等经典的药物动力学方法,分析单室模型药物血管外给药零级释放和一级释放在释放阶段和释放完成后的药物动力学。结果　得到了零级释放和一级释放在释放期间和释放结束后的血药动力学。结论　建立了单室模型药物血管外给药零级释放和一级释放的药物动力学。由于零级释放与一级释放是基本的释放模式,零级释放和一级释放药物动力学理论是建立和理解缓释、控释制剂药物动力学的基础。

精密肺切片方法学的建立及中性红比色法检测肺切片活力的有效性

目的　建立精密肺切片方法学,探讨中性红比色法检测肺切片活力的有效性。方法　 1%低熔琼脂糖充盈肺组织,振荡切片机切片,厚度分别为 400、500、600、700μm, 培养液pH分别为 6 8、7 0、7 2、7 4,预培养 1h,于 24孔培养板持续浸润培养 0、2、4、6h,以中性红比色法,MTT比色法乳酸脱氢酶漏出率,超氧化物歧化酶活力为检测手段确定肺切片最适制备培养条件。结果　肺切片厚 600μm,培养液pH7 0时,活力保持最佳,可稳定维持 6h;不同厚度肺切片中性红摄取率与MTT还原量呈正相关 (r1 = 0 91,P0 05),不同pH培养液培养的肺切片中性红摄取率与MT还原量呈正相关(r2 =0 98,P<0 01 )。结论　精密肺切片是简便可行、有待发展的新型体外模型,中性红比色法操作简便,结果稳定,灵敏准确,可作为肺切片活力判定指标。

天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞增殖和细胞调亡的影响

CTX性肺损伤大鼠肺泡表面张力与肺无机磷、蛋白质含量变化的研究

利培酮和氯氮平及其代谢产物对体外培养大鼠胰岛分泌功能的影响

忆——约翰·万爵士(Sir John Vane)

纪念Sir John Vane——诺贝尔医学奖获得者